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PCR Reaction Reagent Volume Calculator

Esta calculadora ayuda a preparar el volumen de reactivos necesario para una serie de reacciones PCR. Suma muestras y controles, aplica un margen de exceso para compensar pérdidas de pipeteo y calcula cuánto volumen de mezcla sin molde debe prepararse para distribuirlo entre los tubos o pocillos.

Es útil para planificar una master mix cuando cada reacción utiliza el mismo volumen total y el molde se añade por separado. El cálculo no sustituye las proporciones específicas del protocolo: si necesitas conocer el volumen de cada cebador, tampón, polimerasa u otro componente, aplica sus concentraciones o volúmenes por reacción al número de reacciones ajustado.

Datos de entrada

muestras
controles
µL
µL
%
Resultado
—
µL de mezcla sin molde
Reacciones programadas—
Equivalente con exceso—
Molde total sin exceso—

1. Cuenta muestras y controles
Introduce todas las reacciones que recibirán mezcla, incluidos controles positivos, negativos u otros que corresponda.

2. Indica el volumen total por reacción
Usa el volumen final definido por tu protocolo de PCR.

3. Separa el volumen de molde
Introduce el volumen de muestra o ADN que se añade aparte en cada reacción.

4. Añade un margen de exceso
El porcentaje extra compensa pérdidas de pipeteo y volumen residual; usa el criterio de tu procedimiento de laboratorio.

5. Prepara la mezcla
Utiliza el volumen calculado de mezcla sin molde y reparte el volumen correspondiente antes de añadir las muestras por separado.

Reacciones ajustadas = (Muestras + Controles) × (1 + Exceso/100)
Mezcla sin molde = Reacciones ajustadas × (Volumen de reacción − Volumen de molde)

El cálculo supone que el molde se añade por separado y que todas las reacciones comparten el mismo volumen final.

Qué significa el resultado

El resultado indica el volumen total de mezcla de reacción, excluido el molde, que conviene preparar para el conjunto de reacciones y el margen seleccionado.

El resultado es una ayuda de planificación de laboratorio. Verifica siempre el protocolo, las concentraciones y los volúmenes mínimos recomendados para tus reactivos y equipos.

Datos: 24 muestras, 3 controles, 25 µL por reacción, 2 µL de molde y 10 % de exceso.

Cálculo: reacciones programadas = 24 + 3 = 27. Equivalente con exceso = 27 × 1,10 = 29,7. Mezcla por reacción sin molde = 25 − 2 = 23 µL. Volumen total = 29,7 × 23 = 683,1 µL.

Resultado: preparar aproximadamente 683,1 µL de mezcla sin molde.

¿Por qué se añade un porcentaje de exceso?

Porque al repartir volúmenes suele quedar una pequeña cantidad en puntas, tubos o reservorios. El margen debe ajustarse al procedimiento y al número de reacciones.

¿Debo incluir los controles en el número de reacciones?

Sí, si reciben la misma mezcla de PCR. Los controles forman parte del volumen que debes preparar.

¿El volumen del molde se incluye en la master mix?

En este modelo no. Se resta del volumen total por reacción porque se supone que el molde se añade por separado.

¿Qué pasa si el volumen de molde es igual o mayor que el volumen de reacción?

Ese escenario no es válido para esta fórmula. El volumen de molde debe ser menor que el volumen final de la reacción.

¿La calculadora reparte cada reactivo de la mezcla?

No. Calcula el volumen global de mezcla sin molde; para cada componente debes aplicar la receta o concentración especificada por tu protocolo.